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TCS SP5 MP FCS是单光子Confocal、正置双光子扫描显微镜和荧光相关光谱(FCS)单分子检测的集成系统,为目前国内同类产品最高端配置,于2008年底安装。可在2D或3D水平进行高分辨、高灵敏度、实时、活细胞或固定细胞和组织内多重荧光标记的定位(共定位),定量和定性检测,并可同时实现分子或单分子功能的检测。
单光子Confocal常规检测项目:
1. 采集单荧光标记和多重荧光标记样品的二维荧光图像(xy或xz)和透射光的DIC图像.
2. 采集三维荧光图像(xyz或xzy),可清晰显示样品内的微细结构和各种被标记分子荧光信号的相对位置,从而给出精细三维定位或共定位分布的荧光图像.
3. 采用动态跟踪或静态方法检测活细胞的生理变化及损伤情况,如:细胞融合,细胞凋亡等.
4. 实时跟踪荧光信号随着时间的变化(xt,xyt,xyzt),检测细胞内Ca2+、H+、自由基、线粒体膜电位的动态变化.
5. 检测药物进入细胞内的动态过程及分布.
6. 检测样品荧光光谱(xy-λ),可对光谱重叠的多重荧光信号进行光谱拆分.
7. 可进行光活化的检测.
8. 荧光漂白恢复FRAP检测:蛋白分子的运动、转位;细胞间通讯、膜流动性等.
9. 荧光能量共振转移(FRET)的检测。如检测:两种蛋白质之间的相互作用、蛋白质分子构型的改变等.
10. 大视野拼图成像(二维或三维成像),如:全脑组织切片拼图成像。
11. 囊泡、细胞等实时轨迹追踪及轨迹分析
12. 可进行反射光成像:适合观察细胞囊泡、纳米颗粒、生物材料等。
13. 发射光谱扫描
14. 光谱拆分
特色检测项目:
一、 双光子显微镜在体2D/3D/4D(xyzt)成像
1. 在体脑成像及血流检测
2. 在体脊髓成像及血流检测
3. 在体免疫系统成像
4. 在体胚胎成像
5. 在体皮肤组织成像
7. 光活化检测
8. 双光子红外活细胞内精确定位热损伤
二、实时单分子运动、相互作用、分子密度等
1. 荧光相关光谱FCS检测
2. 荧光互相关光谱FCCS检测
具体检测项目:
1)溶液中荧光分子浓度,检查精度达PuM
2)活细胞膜单分子水平分子密度
3)活细胞内运动特性,如:受体内化等
4)活细胞内单分子水平分子之间相互作用
图像处理与定量分析:
1. 专业2D图像分析软件 Qwin
细胞或生物样品的几何形态参数的测量,对特异性组化标记、免疫组化标记的组织或细胞内的化学成份进行光密度测定,还可对荧光标记的生物样品进行荧光强度的测量和几何参数的测量。能测量几十种几何形态参数,如:面积、周长、最大径、最小径、圆周系数等
2. 专业3D图像分析软件Imaris
1)多色荧光标记三维重构和动画制作
2)多色荧光标记3D图像的处理
3)3D共聚焦图像的形态学定量和荧光强度定量分析,包括:细胞或亚细胞器等表面积、体积、粒径,被标记蛋白在3D空间的表达水平和分布
4)神经元树突分析与3D重构
5)实时2D/3D多色荧光分子的轨迹追踪分析
3. 专业3D图像分析软件Volocity
1)多色荧光标记三维重构和动画制作
2)多色荧光标记3D图像的处理
3)3D共聚焦图像的形态学定量和荧光强度定量分析,包括:细胞或亚细胞器等表面积、体积、粒径,被标记蛋白在3的空间的表达水平和分布
4)实时2D/3D多色荧光分子的轨迹追踪分析
1. 多光子激光器:MaiTai DeepZ,激发波长680-1080nm。
2. 单光子激光器:激发波长(nm):405、458、476、488、496、514、561、633。
3. 检测通道数:该仪器设置有3个荧光通道,1个透射通道。
4. 检测波长范围:400-800nm。
5. 专用生理型正置荧光显微镜:以金属卤素灯为光源,配套有不同倍率的APO油镜(APO 100×/1.4、 APO 63×/1.4、APO 40×/1.32、APO 25×/0.75,APO 16×0.5)、干镜(APO 10×/0.4,APO 20×/0.7)和水镜(APO 25×/0.95)。
6. 最高扫描分辨率8096×8096。
7. 扫描频率:5幅/秒(另带固定物台,特别适合小动物在体脑成像)。
8. 超长工作距离红外透光水镜:20x/1.0 ,工作距离2mm。
9. 超长工作距离红外透光Clarity物镜:20x/1.0,工作距离6mm。
10. 二氧化碳温控微型装置。
11. 双通道荧光相关(互相关)光谱FCS/FCCS检测装置。
12. 小动物热台。